2 Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute – pobočka Státní rozpočtové vzdělávací instituce vyššího odborného vzdělávání “Volgogradská státní lékařská univerzita” Ministerstva zdravotnictví Ruské federace
Více než polovina světové populace trpí nemocemi pohybového aparátu. Vzhledem k tomu, že při léčbě tohoto onemocnění jsou předepisována nesteroidní protizánětlivá léčiva (NSAID), je nejčastější komplikací erozivní a ulcerózní poškození sliznice trávicího traktu. Přitom je známo, že existují léčivé rostliny, které mají protizánětlivé účinky. Celosvětové trendy naznačují nárůst jejich používání v léčbě kloubních onemocnění. Účelem studie je studium protizánětlivých a ulcerogenních účinků potenciálně nových druhů léčivých rostlinných surovin – prášků z kůry a výhonků vrby babylonské (Salix babylonica L.) a křížence vrby babylonské a vrby bílé ( Salix babylonica x alba (S.Salamonii Carriere)). V experimentech na potkanech na modelu chronického proliferativního zánětu (vatový granulom) mají drcené prášky studovaných objektů v účinné dávce 68 mg/kg významnou antiexsudativní aktivitu, srovnatelné byly prášky z kůry a výhonků babylonské vrby. na lék diklofenak. Omezením proliferace 3 studované objekty (kůra obou typů vrb a výhonky vrby babylonské) spolehlivě inhibují tvorbu granulační tkáně ve vztahu ke kontrolní skupině. Přitom ze studovaných objektů měla maximální účinek kůra babylonské vrby, která není horší než srovnávací lék diklofenak v redukci tvorby granulační tkáně. Odhalené účinky prášků z kůry a výhonků vrby babylonské a jejího křížence s vrbou bílou do jisté míry přispívají k regeneraci tkání v oblasti zánětu. Ulcerogenní aktivita všech studovaných objektů byla významně nižší než u zvířat léčených diklofenakem. V důsledku toho je jejich dlouhodobé používání při léčbě zánětlivých onemocnění kloubů bezpečnější.
1. Státní registr léčiv [Elektronický zdroj].-Elektron. dan.-M., 2014.-Režim přístupu: http://grls.rosminzdrav.ru/. (datum přístupu: 11.08.15/XNUMX/XNUMX).
2. Kompantseva, E.V., Frolova, O.O., Savenko, I.A. Studium protizánětlivé aktivity výhonků vrby bílé // Problémy farmaceutické vědy a praxe: materiály IV Interregionu. vědecko-praktické conf. s mezinárodními účast (Vladikavkaz, 30.–31. května 2014).- Vladikavkaz, 2014.- S.206-209.
4. Prochorov, I.E. Místo a role použití bylinných přípravků v léčbě kloubní formy juvenilní revmatoidní artritidy // Archives of Clinical and Experimental Medicine. – 2008. – T.17, č. 1. – S.81-84.
5. Registr produktů, které prošly státní registrací [Elektronický zdroj].-Elektron. dan.-M., 2014.-Režim přístupu: http://fp.crc.ru/gosregfr/ (datum přístupu: 11.08.15/XNUMX/XNUMX).
6. Průvodce experimentálním (preklinickým) studiem nových farmakologických látek / ed. RU. Khabrieva.- M.: Medicína, 2005.-P.695-709.
7. Chrubasik S. Důkaz účinnosti rostlinných protizánětlivých léků při léčbě bolestivé osteoartrózy a chronické bolesti dolní části zad // Phytother. Res. – 2007. – Sv. 21. – S.675-683.
8. Vrbová kůra [monografie]: British Pharmacopoeia.- London, 2009.- Vol. III. Bylinné drogy a bylinné přípravky-3p.
10. Vrbová kůra Salix spp. Analytická, kontrola kvality a terapeutická monografie // American Herbal Pharmacopoeia and Therapeutic Compendium. – Santa Cruz, 1999.-16s.
Více než polovina světové populace trpí nemocemi pohybového aparátu. Vzhledem k tomu, že při léčbě tohoto onemocnění jsou předepisována nesteroidní protizánětlivá léčiva (NSAID), je nejčastější komplikací erozivní a ulcerózní poškození sliznice trávicího traktu. Je známo, že NSA mají silný ulcerogenní účinek: ketorolac, piroxicam, lornoxicam, indometacin, butadion, kyselina acetylsalicylová (žaludeční vředy s aspirinem) a za nejbezpečnější léky z této skupiny jsou považovány inhibitory COX-2, kam patří aceklofen, meloxikam , nimesulid, nabumeton, celekoxib, i když mohou také poškodit žaludeční sliznici. Přitom je známo, že existují léčivé rostliny, které mají protizánětlivé účinky. Celosvětové trendy naznačují nárůst jejich používání v léčbě kloubních onemocnění. Nejčastěji hovoříme o kombinovaném užívání, které umožňuje výrazně snížit dávku NSA a předejít gastrotoxickým nežádoucím účinkům [4, 7].
Jednou z těchto rostlin je vrba, která se odedávna používá v lidovém léčitelství jako protizánětlivé a analgetikum. V současné době je vrbová kůra zahrnuta v evropském, britském a americkém bylinném lékopisu a je také součástí oficiálně registrovaných léků a homeopatických přípravků [8,9,10]. Podle Evropského lékopisu (EP) jsou vrby s obsahem salicinu vyšším než 1,5 % (po alkalické hydrolýze) klasifikovány jako lékopisné. Používanou surovinou je kůra mladých větví nebo celých jednoletých větví o průměru nejvýše 10 mm [9]. V Ruské federaci není vrba lékopisnou rostlinou. K dnešnímu dni je u nás registrován pouze jeden lék obsahující vrbu – „Insti“ (bylinné granule obsahující hustý vodnatý extrakt z několika rostlin, z nichž hlavní je kůra vrby bílé) vyráběné společností Herbion Pakistan (Pvt) LTD (Pákistán) [ 1]. Vrbová kůra se vyrábí samostatně ve formě biologicky aktivních přísad (BAA) v Moskvě, Petrohradu a na Altajském území a je součástí mnoha komplexních doplňků stravy [5]. Velké zásoby surovin a možnost pěstování v různých regionech naší země dávají předpoklady pro zařazení různých druhů vrb do Státního lékopisu.
Účel studie je studovat protizánětlivé a ulcerogenní účinky potenciálně nových druhů léčivých rostlinných materiálů – prášků z kůry a výhonků vrby babylonské (Salix babylonica L.) a křížence vrby babylonské a vrby bílé (Salix babylonica x alba (S .Salamonii Carriere)).
Metody výzkumu
Studie byla provedena na vzorcích výhonků a kůry vrby babylonské a jejího hybridu s vrbou bílou, sesbíraných na území Stavropol, v blízkosti Pyatigorsku (záplavová oblast řeky Podkumok) v červnu, červenci a září 2013. . a 2014 Kůra byla sbírána z 2-4letých vrbových větví metodou prstencového řezu. Sběr výhonů (jednoleté větve dlouhé maximálně 30 cm s listy) byl prováděn řezem nožem nebo zahradnickými nůžkami. Suroviny byly sušeny v přírodních podmínkách. Tyto druhy vrb byly vybrány z důvodu možnosti jejich úspěšného pěstování v jižních oblastech Ruska, což v budoucnu umožní pěstovat a získávat suroviny v průmyslovém měřítku bez výrazného poškození přirozených lužních vrbových lesů.
K provedení pokusů jsme připravili vodné suspenze výhonků a kůry vrby babylonské a jejího křížence s vrbou bílou, rozdrcené na jemný stav. Při volbě dávkování jsme vycházeli z dávkování kapslí White Willow Bark (Sunrider Manufacturing, LP, USA), obsahujících 400 mg drcených surovin. Anotace k nim udává denní dávku 400–800 mg [5]. Studované předměty byly podávány potkanům v dávce 68 mg/kg, což odpovídá tomu, že člověk přijme 800 mg prášku denně. Již dříve bylo zjištěno, že toto konkrétní dávkování je optimální [2]. Pro přepočet dávek použitých léků na 1 kg tělesné hmotnosti zvířete byla jednorázová dávka na 1 kg tělesné hmotnosti člověka zvýšena 5,9krát. Pro zajištění stability suspenze byl prášek rostlinného materiálu (900 mg) nejprve rozemlet se 3 kapkami Tween-80. Dále byly po částech přečištěné vody kůra a výhonky babylonské vrby a jejího hybridu kvantitativně přeneseny do 100 ml odměrné baňky a doplněny čištěnou vodou po značku. Krysa o hmotnosti 200 g byla injikována 1,5 ml suspenze.
Referenčním lékem byl diklofenak, který je jedním z nejčastěji používaných NSAID. V současné době je ve Státním registru léčiv 264 názvů léků obsahujících diklofenak [1]. Látka byla podávána potkanům v dávce 8,5 mg/kg, což odpovídá tomu, že člověk užíval terapeutickou dávku 100 mg denně, rovněž ve formě vodné suspenze na Tween-80.
Pro posouzení protizánětlivé aktivity byla zvolena metoda vatového granulomu, která je jedním z nejvhodnějších modelů chronického proliferativního zánětu [9]. Studie byla provedena na 36 samicích krys Wistar o hmotnosti 200-220 g (na začátku experimentu). Během experimentu byla zvířata držena za kontrolovaných podmínek: okolní teplota 22±2˚С, relativní vlhkost 65±5 %. K ustájení zvířat byly použity makrolonové klece T-3 vybavené ocelovými mřížovými víky a krmnou prohlubní. Jako podestýlka byly použity piliny z jiného než jehličnatého dřeva. Zvířata byla držena na standardní dietě s volným přístupem ke krmivu (Kompletní receptura krmiva PK-120 pro chov laboratorních zvířat, GOST R 50258-92, výrobce Laboratorkorm LLC) a vodě. Voda z kohoutku byla dodávána ve standardních lahvích na pití.
Technika byla následující: bílým krysám v anestezii chloralhydrátem (dávka 350 mg/kg) byly oříznuty vlasy v oblasti zad. Za aseptických podmínek byl nůžkami proveden řez kůže a podkoží o délce asi 1 cm, řezem pinzetou se v podkoží vytvořila dutina, do které se vložila sterilizovaná bavlněná koule o hmotnosti 15 mg, načež se dvě na ránu byly umístěny stehy. Osmý den experimentu byla implantovaná kulička s vytvořenou granulační tkání vyjmuta, zvážena a poté vysušena do konstantní hmotnosti při 60-65 °C. Velikost exsudativní fáze zánětu byla posuzována podle rozdílu hmotnosti (mg) kuličky před a po vysušení, velikost proliferační fáze byla posuzována podle rozdílu hmotnosti (mg) sušené kuličky s její počáteční hmotnost 15 mg [3].
Exsudace byla vypočtena pomocí vzorce (1):
kde m3 – exsudace, g;
m1 – hmotnost vaty ihned po vyjmutí ze zvířete, g;
m2 – hmotnost vaty po vysušení, g.
Proliferace byla vypočtena pomocí vzorce (2):
kde m4 – proliferace, g;
m2 – hmotnost vaty po vysušení, g;
0,015 – počáteční hmotnost vaty, g.
Studované drcené výhonky a kůra babylonské a hybridní vrby, stejně jako srovnávací léčivo v ekvivalentním objemu vody, byly podávány sondou do žaludku po dobu 7 dnů. Kontrolním zvířatům byl stejným způsobem injikován fyziologický roztok.
Ke studiu ulcerogenního účinku testovaných objektů byla po odstranění granulomů z vaty testovaným zvířatům v anestezii chloralhydrátem dekapitována hlava, žaludky byly vyjmuty, rozřezány podél menšího zakřivení a promyty v izotonickém roztoku chloridu sodného, aby se odstranil obsah a byla hodnocena míra vlivu testovaných látek na sliznici. Stupeň poškození žaludku byl hodnocen v bodech:
0 bodů – žádné poškození,
1 bod – jednotlivá drobná poranění (1 nebo 2 bodové krvácení);
2 body – mnohočetná poranění (eroze, bodové krvácení);
3 body – významné a mnohočetné poškození sliznice;
4 body – hrubé poškození pokrývající celý povrch sliznice (masivní krvácení, eroze, perforace) (tab. 2).
Statisticky zpracovaná data jsou prezentována ve tvaru M±m, kde M je výběrový průměr, m je chyba průměru. Spolehlivost výsledků byla hodnocena parametricky pomocí Studentova T-testu. Kritická hladina významnosti (p) při testování statistických hypotéz v této studii byla rovna 0,05. Velikost vzorku n=6 v každé skupině zvířat. Studentův T-test – vypočítá se pomocí vzorce (3):
kde M je průměrná hodnota;
m = (největší hodnota – M)*0,18.
Výsledky výzkumu a diskuse
Studie vlivu rozdrcených výhonků a kůry vrby babylonské a jejího křížence s vrbou bílou na rozvoj chronického proliferativního zánětu na modelu granulomu „vata“ ukázala, že prášky získané z kůry a výhonků vrby babylonské a jejího hybridu u vrby bílé výrazně snížená exsudace ve srovnání s kontrolní skupinou o 39 %; 40 % a 35 %; 35 %, respektive (tabulka 1). Porovnání tohoto ukazatele v experimentálních skupinách se skupinou užívající diklofenak (srovnávací lék) neprokázalo významné rozdíly, s výjimkou skupiny užívající prášek hybridních výhonků (výrazně vyšší hodnota exsudace o 7 % oproti diklofenaku). Obecně platí, že prášky z výhonků a kůry vrby babylonské vykazovaly větší antiexsudativní aktivitu ve srovnání s prášky z kůry a výhonků hybridu, ale tento rozdíl nebyl významný.
Analýza vlivu studovaných objektů na proliferativní stadium zánětu ukázala, že 3 studované objekty (kůra obou typů vrb a výhonky vrby babylonské) spolehlivě inhibovaly tvorbu granulační tkáně ve vztahu ke kontrolní skupině.
Výsledky stanovení protizánětlivé aktivity prášků z výhonků a kůry babylonské vrby a hybridu ve srovnání s diklofenakem
